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地球-65，蜘蛛女格温（海莉·斯坦菲尔德 Hailee Steinfeld 配音）因为好友彼特之死而充满愧疚，而父亲对蜘蛛侠的误解也让她倍感焦虑。某次行动中，格温结识了来自其他宇宙的同伴米圭尔·奥哈拉和杰西卡·德鲁。从他们口中得知，为了防止多元宇宙进一步崩坏，米圭尔策划成立了由蜘蛛侠中的精英组成的突击队。格温受邀加入他们，并利用时空穿梭的机会来到了地球-1610，见到久违的迈尔斯（沙梅克·摩尔 Shameik Moore 配音）。此时的迈尔斯和父母关系紧张，他憧憬格温，渴望加入突击队又遭到拒绝。 随后迈尔斯又听到一个可怕的消息，每一个宇宙中，失去至亲正是所有蜘蛛侠的可悲宿命……
杰克·M·约翰森 饰 彼得·B·帕克
来自漫威616宇宙的蜘蛛侠。因被放射性感染的蜘蛛咬伤后获得类似蜘蛛的超能力，从此成为纽约城赫赫有名的超级英雄，但是在那个宇宙与玛丽·简分手，因此自甘堕落，成了中年大叔。直到他帮助训练迈尔斯·莫拉莱斯正视自己，勇于承担肩上的责任，在这期间也慢慢地找回自我。
- 饰 迈尔斯·莫拉莱斯
来自漫威终极宇宙的蜘蛛侠。他来自一个完整的家庭,他的父母双全并且都在尽力给予迈尔斯关爱,这也是迈尔斯的超能力之一。但离开父母变得自立,独自面对更大的世界则是成长的必经之路。他将独当一面,处理好与众多蜘蛛侠为敌的危机。
- 饰 格温·史黛西
来自漫威65宇宙的蜘蛛女侠,被称为“幽灵蜘蛛”或“蜘蛛格温”。她有着不错的力量和速度,能像蜘蛛一样灵活地在城市中穿梭往来。在一次实地考察中,她被一只放射性蜘蛛咬伤。发现自己获得了蜘蛛能力后,她选择背负自己的命运,成为一位蜘蛛侠。
